twitter 白丝 五色多重免疫荧光试剂盒(四标五
发布日期：2024-10-27 20:36 点击次数：57
旨趣先容: 酪酰胺信号放大(TSA， Tyramide signal amplification)本领是一类掌握辣根过氧化酶 （ HRP） 对靶卵白进行象征的酶学检测次第， 肖似旧例免疫组化的 DAB 显色次第 ， TSA 本领相同采 用 HRP 象征的二抗， 相同有对应的 “显色”要领 （HRP 催化加入反映体系的酪胺荧光素底物， 产生 活化荧光底物， 活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价荟萃， 使样品上踏实的共价荟萃酪胺荧光 素。之后用热建立法洗去非共价荟萃的一抗-二抗-HRP 复合物， 重叠下一种一抗-hrp二抗来第二轮孵 育， 换另一种酪胺荧光素底物， 如斯走动就可竣事多重象征。
TSA 贯注旨趣是掌握酪胺 Tyramide的过氧化物酶反映(酪胺盐在 HRP 催化 H202 下酿成共价键荟萃位点)， 产生多量的酶促家具， 该家具能与周围的卵白残基(包括色氨酸、 组氨酸和酪氨酸残基)结 合， 这么在抗原-抗体荟萃部位就有多量的荧光素千里积twitter 白丝， 着力使其检测信号获得 10-100 倍增强。 浅易 来说twitter 白丝， 用这种次第作念多重免疫荧光是掌握二抗上带有的 HRP （而不是径直偶联荧光素） ， 来催化后续 添加入体系的非活性荧光素。 荧光素在 HRP 和过氧化氢的作用下被活化， 跟邻近卵白的酪氨酸残基 共价偶联， 使得卵白样品与荧光素踏实荟萃。 然后微波或煮沸或者水浴等热建立搞定， 前一轮非共价 荟萃的抗体被洗掉， 共价荟萃的荧光素踏实共价荟萃在样本切片卵白上。 再换个一抗来第二轮孵育 ， 轮回走动。 比及通盘抗体孵育收尾， 荧光素齐荟萃好后， 临了去检测着力。 由于每次体系中齐惟有单 一抗体孵育， 因此无需惦念抗体交叉反映， 以及一抗二抗种属匹配问题，
百家乐涩涩快播 大大减少了实际蓄意时不同 种属抗体选拔匹配的浪漫。 也等于说， 如若用 TSA 本领， 归拢张片子上通盘的靶标齐不错选定特异性 高的兔单克隆抗体。 搭配归拢支抗兔的 HRP 二抗就不错进行实际， 何况信号放大的倍数大大增强。 本公司诱骗的试剂盒具体酪胺荧光染料为一下其中一种或者多种： TYR-480， TYR-520， TYR-570 ， TYR-620， TYR-690， TYR-780。 此试剂盒中的荧光染料可单独或协作使用。 不错竣事单标、 双标、 三标以及更多重荧光放大/多重同源抗体荧光象征等功能， 极大丰富了此试剂盒的内涵。
试剂盒构成： TYR-520 荧光染料(绿光)(即用型， 5mL)，-20℃； TYR-570 荧光染料 （红光） (即用型， 5mL)， -20℃； TYR-620 荧光染料 (即用型， 5mL)， -20℃； TYR-690 荧光染料 (即用型， 5mL)， - 20℃； TSA+增强剂， 100ul， -20℃ （可选） ；高敏多聚 hrp 山羊抗兔二抗 （10mL） 4℃。
备注： TYR-520 荧光染料 、TYR-570 荧光染料、 TYR-620 荧光染料、 TYR-690 荧光染料 在-20 度下， 均为固体， 使用之前需解冻。
TSA+增强剂使用次第： TSA+增强剂不祥进一步增强荧光信号放大液的放大信号 5-10 倍， TSA+增 强剂： TYR 荧光放大液=1:500， 使用 TSA+增强剂不是必须的选项， 不错阐明具体的情况选拔添加 或者不选拔添加。
操作进程：
1、 石蜡切片脱蜡至水： 次第将切片放入二甲苯 Ⅰ 15min-二甲苯Ⅱ15min-无水酒精 Ⅰ5min-无水酒精 Ⅱ。 取出放在透风厨内， 酒精晾干后放入自来水中稍洗， 蒸馏水洗。
2、 抗原建立： 组织切片置于盛满 PH 9.0 EDTA 碱性抗原建立液或者 PH6.0 柠檬酸建立缓冲液的建立 盒中于微波炉内进行抗原建立 （也不错用高压 1-2min 100 度水煮 15min 95 度水浴 20min等其他 热建立次第） 。 中火 8min， 媾和 8min， 转中低火 7min， 此过程中应珍爱缓冲液过度挥发， 切勿 干片。 当然冷却后将玻片置于 PBS（PH7.4）中在消除摇床上踟蹰洗涤 3 次， 每次 5min。 (建立液 和建立条目阐明组织类型以及抗原类型来细目） 。
3 、 阻断内源性过氧化物酶： 切片放入 3%过氧化氢溶液， 室温避光孵育 15 min， 将玻片置于 PBS （PH7.4） 中在消除摇床上踟蹰洗涤 3 次， 每次 5min。
4、 BSA 阻塞:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈 （珍爱抗体流走） ， 在圈内滴加用 3%BSA-PBS （或者其他阻塞液） 均匀覆没组织， 室温阻塞 30min。
5、 加一抗： 轻轻甩手阻塞液， 在切片上滴加用抗体稀释液稀释好的的一抗 X， 切片平放于避光湿盒 内 4°C 孵育过夜或者 37 度 1-2h。 （湿盒内加少许水珍爱抗体挥发）
6、 加 hrp 二抗： 玻片置于 PBS（PH7.4）中在消除摇床上踟蹰洗涤 3 次， 每次 5min。 切片稍甩干后 在圈内滴加与一抗相应种属的hrp二抗覆没组织， 避光室温孵育 50min， PBS 洗三次。
7、 荧光染料反映： TYRXXX 荧光染料反映 10-15min， PBS 洗三次。
8、 重叠 2-7 要领 （换用另外一种 TYRXXX 荧光染料）
9、 DAPI 复染细胞核： 玻片置于 PBS（PH7.4）中在消除摇床上踟蹰洗涤 3 次， 每次 5min。 切片稍 甩干后在圈内滴加 DAPI 染液， 避光室温孵育 10min。
10、 封片： 玻片置于 PBS（PH7.4）中在消除摇床上踟蹰洗涤 3 次， 每次 5min。 切片稍甩干后用抗 荧光淬灭封片剂封片。
11、 镜检拍照： 切片于荧显豁微镜/共聚焦/多通谈荧光扫描仪/多光谱成像系统下不雅察并网罗图 像。
染料 激励波长 辐照波长
DAPI 蓝色 350 420
TYR-480 450 480
TYR-520 绿色 490 520
TYR-570 红色 550 570
TYR-620 590 620
TYR-690 630 690
TYR-780 750 780
著述援用试剂盒/次第： Co-staining of A， B ， C and D was performed using a Five-color Fluorescence kit ( GuduoBio Biological Technology， Shanghai， China) based on the tyramide signal amplification (TSA) technology according to the manufacture’s instruction.
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